Em um estudo com células precursoras neurais, pesquisadores usaram uma proteína dCas9-DNMT3A guiada até o…
Publicado por Alexandre Lombardi dos Santos, fundador do GeraProva
Construir questões, elaborar hipóteses, previsões e estimativas, empregar instrumentos de medição e representar e interpretar modelos explicativos, dados e/ou resultados experimentais para construir, avaliar e justificar conclusões no enfrentamento de situações-problema sob uma perspectiva científica.
Fonte: Base Nacional Comum Curricular (MEC).Questão
Em um estudo com células precursoras neurais, pesquisadores usaram uma proteína dCas9-DNMT3A guiada até o promotor do gene N, sem cortar o DNA. Após o tratamento, a metilação do promotor aumentou, a marca de histona H3K27ac diminuiu e a produção de RNA do gene foi reduzida. Como o recrutamento da proteína também pode alterar a cromatina, os pesquisadores precisaram separar o efeito da metilação do efeito da própria manipulação experimental. Qual comparação experimental permite testar mais diretamente se a redução do RNA depende da atividade de metilação da DNMT3A, e não apenas do recrutamento da proteína ao promotor?
- A) Comparar células que recebem a dCas9-DNMT3A ativa com células que recebem a mesma guia e uma versão cataliticamente inativa da DNMT3A, medindo metilação, H3K27ac e produção de RNA.
- B) Comparar células com a sequência do promotor alterada por uma nuclease com células que mantêm a sequência original, avaliando a produção de RNA do gene N.
- C) Comparar células que recebem a dCas9-DNMT3A ativa com células sem qualquer tratamento, medindo a produção de RNA do gene N.
- D) Comparar células com alta e baixa H3K27ac e concluir que a redução dessa marca é a causa primária da menor produção de RNA do gene N.
- E) Comparar células que recebem a dCas9-DNMT3A ativa com células que recebem a mesma proteína ligada a uma guia que não reconhece o promotor, medindo apenas a metilação.
✅ Resposta correta: alternativa A
Resolução passo a passo
- O problema pede uma comparação que separe a atividade de metilação da DNMT3A do simples recrutamento da proteína ao promotor. Passo 2: A alternativa A é a correta porque mantém a mesma guia, ou seja, o mesmo recrutamento ao promotor do gene N, e troca apenas a DNMT3A ativa por uma versão cataliticamente inativa. Se a redução do RNA ocorrer só com a enzima ativa, ela depende da metilação; se ocorrer também com a inativa, o efeito vem do recrutamento. Passo 3: Medir metilação, H3K27ac e RNA nas duas condições permite verificar cada elo da cadeia, e não apenas um deles. Passo 4: A alternativa B está errada porque altera a sequência do promotor com nuclease, o que muda o próprio gene e não isola a atividade de metilação. Passo 5: A alternativa C está errada porque comparar com células sem tratamento não separa a metilação do efeito da manipulação experimental, pois a proteína e a guia continuam ausentes do controle. Passo 6: A alternativa D está errada porque correlação entre níveis de H3K27ac não prova causalidade e não testa a metilação da DNMT3A. Passo 7: A alternativa E está errada porque usa uma guia que não reconhece o promotor, o que testa apenas o recrutamento, e mede somente a metilação, deixando de avaliar a produção de RNA, que é o desfecho da pergunta. Passo 8: Conclusão: o gabarito oficial A está correto e é a comparação mais direta para o objetivo proposto.
💡 Dica: comparar efeito da dCas9-DNMT3A ativa com versão inativa para isolar metilação
Alternativa por alternativa
A comparação mantém constante o direcionamento ao promotor e altera apenas a capacidade de adicionar metil grupos. Assim, diferenças na expressão podem ser relacionadas à atividade de metilação, acompanhando também a modificação das histonas.
O aluno acha que alterar a sequência do promotor com nuclease é uma forma válida de testar a função do promotor, sem perceber que isso modifica o próprio gene e não isola a atividade enzimática de metilação.
O aluno acredita que comparar com células sem tratamento basta para atribuir a redução do RNA à DNMT3A, sem notar que o controle não tem a proteína nem a guia, portanto não separa o efeito da manipulação experimental.
Por que engana: confundir efeito do recrutamento proteico com atividade catalítica da DNMT3A
O aluno confunde correlação com causalidade e supõe que a menor H3K27ac explica diretamente a queda do RNA, o que não responde à pergunta sobre a dependência da atividade da DNMT3A.
O aluno percebe que a guia errada serve como controle de recrutamento, mas não nota que medir apenas a metilação deixa de testar a produção de RNA, que é o desfecho investigado.
Raio-X da questão
controle experimental em epigenética
identificar o contro
epigenética: metilação do DNA e marcas de histonas · interpretação de resultados experimentais
função das proteínas dCas9 e DNMT3A
confundir efeito do recrutamento proteico com atividade catalítica da DNMT3A
ciência, tecnologia e sociedade
pensamento crítico
laboratório de biolo
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