Considere uma população celular em que o complexo de Golgi apresenta disfunção ruim na organização de…

Questão

Considere uma população celular em que o complexo de Golgi apresenta disfunção ruim na organização de cisternas e na atividade de glicosiltransferases. Analise os impactos dessa disfunção sobre: (a) a glicosilação de proteínas de membrana e sua estabilidade; (b) o tráfego vesicular e a secreção de proteínas; e (c) a resposta imune adaptativa mediada por antígenos de superfície. Proponha dois experimentos para testar alterações na glicosilação de proteínas de superfície e descreva os resultados esperados em cada experimento.

✍️ Questão dissertativa: veja abaixo a resposta esperada e a explicação.

Resposta esperada

Impactos (mecanismos): (a) Glicosilação — A perda da organização cis-Golgi/trans-Golgi ou da atividade de glicosiltransferases impede o processamento correto de oligosacarídeos (remodelagem de high-mannose para formas complexas). Proteínas de membrana ficarão com formas imaturas (high-mannose), possivelmente mal dobradas ou instáveis, aumentando sua retenção ou degradação por via ERAD e reduzindo meia-vida na superfície. (b) Tráfego e secreção — Defeitos no Golgi causam acúmulo de proteínas nas cisternas anteriores, falha na segregação em vesículas específicas e redução da exocitose; isso pode levar à secreção diminuída e acúmulo de proteínas secretoras no retículo endoplasmático, provocando estresse do RE e ativação da UPR. (c) Resposta imune adaptativa — Alterações na glicosilação de proteínas de superfície (incluindo moléculas de adesão e MHC) podem afetar apresentação antigênica e reconhecimento por linfócitos T e anticorpos. Por exemplo, MHC I com glicosilação defeituosa pode ser mal processado ou expresso em menor quantidade na superfície, reduzindo apresentação de peptídeos a CTLs e comprometendo a resposta imune. Propostas experimentais e resultados esperados: 1) Análise por lectin-blot e Endo H/PNGase F: Isolar proteínas de membrana e submeter a digestão com Endo H (sensível a formas high-mannose) e PNGase F (remove N-glicanos). Em células com Golgi disfuncional espera-se maior sensibilidade a Endo H (indicando predominância de high-mannose) e alteração no padrão de bandas em lectin-blot (perda de sinais para lectinas que reconhecem glicanos complexos, como SNA/ConA dependendo do açúcar). 2) Fluxo celular (flow cytometry) com lectinas marcadas ou anticorpos para formas glicosiladas específicas, combinado com ensaio funcional de apresentação antigênica: medir expressão de proteínas de superfície (p.ex. MHC I) e ligação por lectinas específicas; em seguida, co-cultivar com linfócitos T específicos e medir ativação (produção de IFN-? ou proliferação). Resultado esperado: redução do sinal de lectinas que marcam glicanos complexos na superfície, menor intensidade de MHC I funcional na membrana e diminuição da ativação de linfócitos T. Controles e complementos: incluir tratamento com brefeldina A como controle químico de bloqueio do tráfego Golgi?RE; usar recuperação por expressão de glicosiltransferase funcional para demonstrar reversibilidade; empregar espectrometria de massas de glicanos para caracterizar mudanças nos sítios e estruturas dos N-glicanos. Conclusão: Disfunção do Golgi altera a qualidade da glicosilação, prejudica o tráfego e a secreção e pode comprometer a apresentação antigênica, com efeitos detectáveis por lectin-blot, sensibilidade a Endo H e alterações na ativação de células T em ensaios funcionais.

Explicação

A explicação aborda de forma clara os impactos da disfunção do complexo de Golgi em diferentes aspectos celulares, como glicosilação, tráfego vesicular e resposta imune. Os experimentos propostos são relevantes e bem fundamentados, permitindo a análise das alterações na glicosilação e suas consequências funcionais. A inclusão de controles e complementos fortalece a validade dos resultados esperados, demonstrando uma compreensão abrangente do tema.

Raio-X da questão

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